免疫组织化学在淋巴组织增生性病变病理诊断中的应用

　　免疫组织化学是利用特定抗体与细胞内特定对应的抗原相结合的原理检测淋巴组织内不同类型细胞的标志物。它是目前淋巴组织增生性病变病理诊断、鉴别诊断及淋巴瘤分类不可缺少的辅助检测技术。目前国际通用的CD系列抗体有247种，非CD系列有若干种，如CK、EMA、S100、TdT、Cyclin D1等，绝大多数抗体可用石蜡包埋组织切片标记。抗体可分为多克隆性和单克隆性，前者性差，后者性强，但成本高。目前尚存在性与性不足的问题。免疫组织化学技术操作方便，便于推广应用，但要高质量的效果并非易事，必须注意以下几方面。

　　（2）做好淋巴组织固定，如果组织固定不好，细胞自溶、抗原可能导致假阴性或假阳性等。这需要病理科与临床相关人员配合，当淋巴结完整取出以后立即切开（一般切成约0.3 cm厚）并投入10%~20%缓冲甲醛溶液（10倍于标本体积）。切勿放入一般水溶液或95%乙醇溶液中。

　　同类抗体的性与性不同，配伍时应该取长补短，如B细胞的标记中的CD20性较好，但少数T细胞也可阳性，母细胞与浆细胞阴性；CD79α则母细胞与浆细胞可阳性；PAX-5性最强，母细胞阳性，而浆细胞阴性，因此B细胞淋巴瘤采用上述2种或多种抗体联合检测则效果更好，如果应用单一抗体检测就会出现漏诊，再补做其他抗体则会延迟诊断的时间。

　　淋巴组织增生性病变通过常规抗体套餐的合理配伍一次就可完成诊断。笔者列出以下抗体套餐供参考：CD20、CD79α、PAX5、CD3、CD45RO（或CD43）、CD21、Ki-67、CD163。B细胞标记抗体PAX5核阳性，性最强，有时B细胞淋巴瘤富于T细胞反应时，如PAX5弥漫阳性，则可定为B细胞淋巴瘤。T细胞标记抗体CD3性好，但约有10%的T细胞不表达；CD45RO可以弥补其不足，但组织细胞、髓细胞及约5%的B细胞也可能阳性；CD43与CD45RO相似，但套细胞淋巴瘤也可阳性。CD163对窦性或反应性组织细胞或组织细胞肉瘤阳性，CD21（或CD23、CD35）用于标记滤泡树突细胞网，其对判断淋巴滤泡保存或受到可起到辅助作用。Ki-67对于标记淋巴组织细胞增生或瘤细胞的增殖指数有良好的作用，同时对滤泡生发中心的标记及有无异常亦有良好的辅助作用。上述套餐为常用的免疫组织化学抗体套餐，可根据患者具体情况再增加特定的抗体。

　　（2）阳性表达定位不准确视为假阳性，如S100阳性应为核质着色，如为单一膜阳性，则为假阳性；（3）阳性对照为阳性，而待检组织为阴性，则为假阴性；

　　（4）待检组织100%阴性多数为假阴性，因为任何良恶性淋巴组织没有100%由单一性细胞组成。

　　不同抗体阳性表达的细胞部位不同，如CD20、CD10、CD45RO为细胞膜阳性，而CD3、CK、CD68等抗体为胞质阳性，PAX5、Ki-67为胞核阳性，S100为胞核与胞质共阳性，如果出现不正常的定位表达则视为结果不准确、无效，而CD30一般为膜点（胞质高尔基区），同时可以点明显，而膜很淡或胞膜、胞质共阳性。

　　实践表明几乎没有一种抗体是100%的。例如TdT一般认为只有淋巴母细胞淋巴瘤细胞和胸腺T细胞阳性，但后来发现上消化道和上呼吸道增生淋巴组织Castleman病、肝细胞癌、腺泡细胞癌等病变中均可出现TdT阳性细胞。Cyclin D1已往认为只有在套细胞淋巴瘤中阳性，但后来发现小淋巴细胞淋巴瘤的增殖中心、浆细胞瘤、毛细胞白血病等均可出现阳性。另外常用的CD45RO、CD43，除T细胞阳性外，组织细胞和髓细胞亦可阳性。

　　因淋巴瘤细胞具有抗原性，故存在不同数量的反应性细胞（T、B淋巴细胞及组织细胞），在少数淋巴瘤如富于T和（或）组织细胞的大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿、霍奇金淋巴瘤等中，反应性细胞多于瘤细胞。绝不能以优势阳性细胞定为淋巴瘤类型，而要以异型瘤细胞的免疫标记抗体确定淋巴瘤类型。在低级别B细胞非霍奇金淋巴瘤中，瘤细胞体积小，在反应性T细胞数量亦较多的情况下，确定瘤细胞表型十分困难，在这种情况下可增加PAX5抗体，如为弥漫浸润阳性，则可定为B细胞淋巴瘤。CD30标记R-S细胞和反应性活化T或B淋巴细胞均可阳性，绝不能见到CD30阳性细胞就定为霍奇金淋巴瘤，一定要在HE切片中确定为够条件的R-S细胞，同时多数CD15与EB病毒编码的小RNA（EBER）亦阳性，PAX5弱阳性，再结合组织病理才可确诊。

　　（1）κ与λ免疫组织化学的正确应用与评估：根据实际应用的结果，国内免疫组织化学κ、λ对B细胞增生性病变良恶性的检测不像国外报告的那么好，仅对浆细胞瘤与浆细胞肉芽肿鉴别效果较好，过分信赖可能导致误诊。最近研究显示采用原位杂交方法结果较满意，但成本高。有关κ与λ阳性细胞量的标准，最好在10∶1以内。

　　（2）某些抗体的异常表达：CD4、CD8在同一种细胞中表达提示为恶性。CD5、CD43可在套细胞淋巴瘤表达。CD5、CD23可在小B细胞淋巴瘤中表达，PAX5在R-S细胞中弱阳性，而在间变性大细胞淋巴瘤细胞中阴性表达，但最近亦有报道见阳性表达者。

　　（3）免疫组织化学在良恶性病变中表型模式的识别：B细胞阳性标记表型超出淋巴滤泡区或弥漫阳性为B细胞淋巴瘤。增生淋巴滤泡CD20、CD79α、PAX5阳性，边界较清楚；CD10、bcl-6、Ki-67生发中心表达，边界十分清楚；Ki-67一般指数高（>30%），且可出现明暗极现象；bcl-2生发中心阴性，边界清楚。滤泡分散，极少有背靠背或相互融合现象。滤泡性淋巴瘤结节免疫标记，边界不清，密集，背靠背现象易见；CD10、bcl-6、Ki-67失去生发中心的表型模式，边界不清，向结节间浸润；bcl-2：1~2级瘤结节阳性，3级部分瘤结节可阴性，但边界不规则。

　　CD21（或CD23、CD35）标记滤泡树突细胞网的，其对小血管、腺上皮被成淋巴上皮病变、瘤组织并替代正常淋巴组织表型呈单克隆性。

　　免疫组织化学在淋巴组织增生性病变的病理诊断与鉴别诊断中是不可缺少的技术之一，但要求确保质量和正确识别结果，同时要与其他病理诊断要素紧密结合才可发挥其应有的作用，切忌片面、主观地评估免疫表型的作用。

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